Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Определение гемоглобина в крови – методы диагностики, строение и физиология гемоглобина

Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Методы определения содержания гемоглобина в крови разнятся между собой. Их особенности зависят от реактива, который используется в лабораториях, безопасности исследования, его точности и скорости. По результатам анализов проходит диагностика.

Клиническое значение определения гемоглобина

Гемоглобин образуется в эритроцитах. Делая вдох, кровяные тельца насыщаются кислородом. Через них белок по крови «доставляет» кислород в ткани, а затем, возвращаясь, углекислый газ попадает в легкие. Именно Hb в какой-то мере отвечает за такую важную функцию, как дыхание.

У взрослого человека значения гемоглобина зависят от пола. У женщин концентрация клеток ниже, так как их мышечная масса обычно меньше:

  • 12-16 г/% или 120-160 г/л для мужчин;
  • 11-14г/% или 110-140 г/л для женщин.

Эти показатели являются нормой. Их изменения в большую или меньшую сторон говорит о заболевании. Во время беременности или в пожилом возрасте показатели могут снижаться. Если понижение не связано с этими факторами, врачи часто диагностируют:

  • железодефицитная, серповидно-клеточная анемия, которая приводит к уменьшению эритроцитов;
  • недостаток фолиевой кислоты или витамина В12;
  • болезни красного костного мозга.

Повышение гемоглобина тоже ведет за собой плохие последствия. Часто симптом связан с рядом проблем:

  • злокачественные новообразования, болезни красного костного мозга;
  • увеличение числа эритроцитов в связи с сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
  • уменьшение плазмы крови.

Гемоглобин образуется в эритроцитах после того, как пропадает ядро или приобретения клетки зрелости. Селезенка утилизирует красные кровяные тельца и Hb. 1 клетка живет 4 месяца. После того, как она погибает, в крови образуется железо. Оно попадает в красный костный мозг. С его помощью появляются новые красные кровяные клетки.

Методы измерения гемоглобина в крови

Определение концентрации гемоглобина возможно с помощью нескольких методов. Hb измеряют еще и в моче, так как в мочевыводительной системе бывают кровотечения (как незначительные, так и обильные).

Различают несколько основных форм гемоглобина:

  • оксигемоглобин;
  • карбоксигемоглобин;
  • дезоксигемоглобин.

Для анализа все формы Hb с помощью реактивов делают одинаковыми, чтобы их мог считать прибор. После применения определенной методики, используют полуавтоматический анализатор. С его помощью измеряют спектр длины волны молекулы гемоглобина.

Такой анализатор исключает возможность реставрации ошибки врача в отчете необходимого значения. Аппарат также не способен увидеть и распознать различные нарушения в параметрах.

Ручной подсчет применяется с реактивом и биолоатериала. Такой способ не считает количество клеток, а определяет их присутствие в жидкости. Часто используют для анализа мочи.

Унифицированные методы определения гемоглобина

Исследование является точный, быстрым и используется в большинстве лабораторий. Для Hb подходит гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Метод основывается на определении точного числа клеток при помощи подсчета длины волны молекулы на специальном полуавтоматическом приборе.

Другой способ — гимехромный. Проводится также, однако для него используются более качественные реактивы, которые не вредят здоровью исследователя. Метод является более щадящим и применяется чаще первого.

Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови

Определить длину Hb сложно, так как он имеет много разных форм. Для упрощения процесса и более точных результатов его превращают в метгемоблогин. Делается это с помощью специальных химических веществ.

Чтобы правильно провести анализ необходим трансформирующий раствор, измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Длина волны гемоглобина составляет 540 м. В таком пределе аппарат определяет нужный показатель. Полученный результат высчитывается по формуле и переводится в значение граммы на литры.

Этот метод одобрен Комитетом здравоохранения из-за того, что он является максимально точным. Он имеет много положительных сторон:

  • дешевизна реактивов, которая не требует от медицинского учреждения большого бюджета;
  • простата в проведении: даже студент-лаборант сможет провести процедуру;
  • скорость анализа;
  • использование полуавтоматического анализатора, что исключает врачебную ошибку в подсчетах.

Несмотря на все плюсы, методику считают устарелой. У нее есть ряд серьезных недостатков:

  • используемые вещества опасны для здоровья врача: при неправильной эксплуатации возможны поражение слизистых, кожи, дыхательных путей;
  • наличие современных и полностью безопасных методов работы;
  • врачебная ошибка возможна на этапе выбора дозировки реактивов.

Метод проводится с использованием цианидных компонентов, что является опасным для здоровья врачей химикатом.

Гемиглобинцианидный способ исследования -точный анализ, который применялся раннее в каждом лаборатории. Сейчас же на смену ему пришли более современные методы.

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови

Здесь клетки Hb переводят в форму гемихрома (HbChr). Его легко удается подсчитать. По полученному числу врачи определяют концентрацию гемоглобина в биоматериале. Методика имеет множество плюсов:

  • 2 варианта забора материала: капилярная крови или венозная;
  • скорость исследования. Результаты будут готовы в день сдачи;
  • безопасность для сотрудников, так как при анализе не используются опасные для здоровья вещества;
  • полуавтоматический анализатор, который используют для подсчета количества клеток. Исключает врачебную ошибку;
  • простота метода и цена используемых реактивов;
  • высокая точность показателей, на основе которых врач делает выводы о состоянии пациента;
  • использование небольшого количества крови. Если результаты показались сомнительными, анализ всегда можно сделать повторно.

Исследование полностью безопасно, но и у него есть ряд минусов. Делая выводы по поводу диагноза, специалист всегда должен помнить о недостатках методики:

  • ошибки при сборе крови;
  • неправильная концентрация реактивов или их неверное подготовление;
  • размер клеток и их форму рассмотреть невозможно, так как фотометр лишь подсчитывает их количество.

Гемихромный метод используется врачами довольно часто для постановки диагноза больному. Он точен, безопасен и не затратен для больницы, поэтому очень популярен при анализе крови.

Цианидный метод исследования гемоглобина в крови

В капиллярную или венозную крови добавляется трансформирующий раствор. С его помощью образуется метгемоглобин.

Цианид — опасное вещество, которое может навредить здоровью врачей-лаборантов. Поэтому метод является опасным и практически не проводится в медицинских учреждениях.

В пробирке смешивают 5 мл реагента и 20 мл биоматериала. В течение 10 минут происходит реакция. Жидкость выливают в специальный сосуд, через который фотоэлектроколориметр пропускает лучи. Он подсчитывает количество элементов, длина которых составляет 543 нм. гемоглобина высчитывается далее по формуле.

Метод сали для определения гемоглобина в крови

Анализ основывается на визуальном определении содержания гемоглобина, то есть на колориметрии. Это делают при сравнении окраски исследуемого материала с раствором солянокислого гематина.

В кровь человека добавляют хлористоводородную кислоту. Благодаря этому Hb переходит в форму солянокислого гематина. В раствор далее наливают дистиллированную воду (до тех пор, пока цвет не будет таким же коричневым, как в контрольной пробирке). Для сравнения используют специальный колориметрический аппарат.

Снизу пробирки будет цифра, которая показывает содержание показателя в 100г крови. Чтобы выделить количество клеток в литре, результат умножают на 10. Далее врач рассчитывает результаты по формуле.

Метод имеет погрешность в 30%, что делает его недостаточно точным для постановки диагноза больному. Из-за этого лаборанты применяют его в работе редко.

Источник: https://serdechniku.ru/gemoglobin/opredelenie-gemoglobina-v-krovi-metody-diagnostiki-stroenie-i-fiziologiya-gemoglobina

Строение и физиология гемоглобина

Гемоглобин – это четвертичная глобула, которая занимается утилизацией и поставкой оксидов в организме человека. Данное пептидное соединение является тетрамером, состоящим из четырех субъединиц. Одна полипептидная структура способна переносить через кровоток до четырех молекул кислорода.

Гемоглобин состоит из простетической группы и глобулина. Простетическую группу железосодержащего пептида принято называть «гемом». Благодаря гему кровь приобретает свойственный ей окрас – алый или синевато-красный. Простетическая группа содержит железо, которое участвует в восстановительно-окислительных процессах.

Различают несколько основных видов гемоглобина:

  • Оксигемоглобин,
  • Карбоксигемоглобин,
  • Дезоксигемоглобин,

Оксигемоглобин образуется при присоединении кислорода к гемоглобину в условиях высокого парциального давления. При отщеплении кислорода от железосодержащего белка образуется устойчивая форма – дезоксигемоглобин.

Карбоксигемоглобин появляется в результате присоединения монооксида или диоксида углерода.

Стоит отметить, что монооксид углерода в 250 раз эффективнее связывается с железосодержащим белком, чем обуславливается его опасность для жизни при вдыхании (угарный газ).

Дезоксигемоглобин сильно токсичен для тканей человеческого организма, поэтому существуют специальные системы «ликвидации» гемоглобина в крови. Этим занимается особое пептидное соединение – гаптоглобин.

Определение количества гемоглобина по методу Сали

Метод базируется на свойстве железосодержащего белка превращаться в хлорид гематита под действием соляной кислоты. Методика Сали считается неинвазивным вмешательством.

Интенсивность цвета жидкости прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в крови. Раствор хлоргемина при проведении исследования разводят дистиллированной водой до стандартного цветового спектра.

Важно! Стоит отметить, что гемоглобин по Сали не получил широкого распространения на территории РФ.

Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали». Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда.

Боковые гнезда держат две склянки с веществами. Среднее гнездо данного прибора необходимо для размещения пронумерованной мензурки из стекла.

Градуированная мензурка обладает шкалой с делениями, которые измеряют количество железосодержащего пептидного соединения в граммах на децилитр (г/дл).

При клиническом исследовании крови используется специальная пипетка для воды и размешивания содержимого склянки.

При проведении полного анализа по методу Сали вначале в склянку наливается 0.10% раствор соляной кислоты. Потом выполняется забор исследовательского материала из кончика пальца в пипетку до отметки «0.04 мл». Впоследствии пипетку обтирают стерилизованной ваткой и размещают в мензурку с раствором HCl.

Медицинский сотрудник несколько раз встряхнет содержимое пробирки и поставит отстаиваться. Полное химическое превращение железосодержащего пептидного соединения в растворе соляной кислоты происходит не менее чем за 10-15 минут.

По истечении пяти минут оценивается цвет жидкости в гемометре со стандартными цветами. Как правило, он более темный, нежели в стандартных пробирках.

Используя обычную пипетку к раствору постепенно добавляют чистую воду, попеременно перемешивая содержимое и сравнивая со стандартным цветом. На окончательном этапе цвет материала должен сравняться с нормативом.

После всего вышеперечисленного замеряют уровень жидкости и проводят соответствующие подсчеты.

В промышленном масштабе выпускаются гемометры, которые содержат исключительно грамм-процентную градуированную шкалу. Нормой гемоглобина у мужчин и женщин принято считать значения 15 г%, или 168 г/дл. Но даже при соблюдении определенных правил наблюдаются небольшие погрешности в измерениях. В некоторых случаях разные результаты могут в значительной мере исказить данные о болезни.

Цианметгемоглобиновый метод определения содержания гемоглобина в крови

Стандартизированным и наиболее точным методом определения гемоглобина принято считать гемоглобинцианидный анализ. Такая методика базируется на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин при добавлении к биологическому материалу определенного вещества.

цианметгемоглобина замеряют фотометрически. При анализе крови в роли реактива применяется раствор Драбкина. Железосодержащий белок под влиянием синеродисто-железистого калия превращается в метгемоглобин, который потом преобразуется в присутствии цианина калия в гемиглобинцианид.

Типичное соотношение разведения биологического материала с реагентом — 2 : 500 (0,04 миллилитров капель крови и 10 мл реактива).

По истечении 30 минут, которые нужны для полного преобразования железосодержащего пептида в гемиглобинцианид, измеряют «гашение» при длине волны в 550 нанометров и плюс толщине слоя в 2 см против воды на спектрофотометре СФ или на ФЭК и ему похожей технике. С помощью СФ также измеряют уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

На данный момент разработаны гемиглобинцианидные цветовые стандарты в ампулах, которые точно соответствуют определенному уровню железосодержащего белка. Растворы, полученные в результате определенных реакций, исследуют с помощью колориметрии. После всего рисуют рабочие таблицы и узнают, какое количество железосодержащего пептидного соединения содержится в кровотоке.

Есть устройства, специально созданные для определения количества гемоглобина. Зачастую используются именно циангемоглобиновые методы определения гемоглобина.

Как правило, гемоглобинометрические приборы могут работать самостоятельно. Широкое применение такие тест-устройства для определения гемоглобина в крови получили в домашних условиях.

Однако в ряде ситуаций больные не учитывают влияние внешних факторов в доме (стресса, еды).

Другой набор методов диагностики уровня гемоглобина в крови

Значительную известность и распространение среди различных лабораторий получила методика гемихром (или гемихромный метод). Принцип данного метода основан на преобразовании всех форм железосодержащего пептида в гемихром, который имеет красноватый цвет. Преимущество гемихромного метода заключается в том, что он не является токсичным.

Иногда назначают прохождение биохимического исследования на гликированный гемоглобин. Стоит отметить, что важное значение гликозилированный гемоглобин и глюкометр имеют при диагностике сахарного диабета.

При определенных состояниях в моче может содержаться гемоглобин, поэтому нередко данная биологическая жидкость и ее анализы являются важными частями диагностики различных заболеваний. Такое случается при переливании несовместимой крови от донора, в особенности у ребенка.

Загрузка…

Источник: https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/gemoglobin/osobennosti-opredeleniya-gemoglobina-v-krovi-osnovnye-metody-diagnostiki-i-lecheniya-patologicheskih-sostoyanij

Определение гемоглобина в крови

Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Доклад

Определение гемоглобина в крови

Гемоглобин – основной дыхательный белок крови и главный компонент эритроцитов. Гемоглобин играет ключевую роль в системе дыхания организма человека: он осуществляет перенос кислорода из легких в ткани организма и углекислого газа из тканей в легкие.

Гемоглобин – это красный пигмент крови человека и животных. Подсчитано, что в одном эритроците содержится в среднем около 340 млн молекул гемоглобина. По своей химической структуре он представляет собой сложный белок, относящийся к гемопротеинам.

В состав молекулы гемоглобина входят четыре субъеденицы, каждая из которых состоит из белковой части – глобина и небелковой части – гема.

Молекула гема состоит из сложного гетероциклического соединения порфирина IХ, в центре которого находится двухвалентный атом железа, связанный с молекулой порфирина через атомы азота двумя валентными и двумя координационными связями. Степень окисления железа не изменяется ни при отдаче, ни при присоединении атома кислорода.

Рис. 1. Строение молекулы гемоглобина

Гемоглобины представляют собой тетрамерные белки, молекулы которых образованы различными типами полипептидных цепей, обозначаемых как б, в, г, д. В состав молекулы гемоглобина входят по 2 полипептидные цепи двух разных типов, каждая из которых связана с гемом.

У человека обнаружены гемоглобины различных типов, которые отличаются по химическому строению. В крови взрослого человека содержится гемоглобин А (HbA), состоящий из б2в2 цепей. В дополнение к основному типу гемоглобина HbA, в крови взрослого человека обнаружен гемоглобин A2 (HbA2).

Также существует фетальный гемоглобин F (HbF), который называют гемоглобином новорожденных. В крови новорожденного ребёнка на долю фетального гемоглобина приходится около 80%. К концу первого года жизни ребёнка фетальный гемоглобин почти целиком замещается на гемоглобин А.

Фетальный гемоглобин состоит из полипептидных цепей б2г2 и отличается от гемоглобина А вторичной, третичной и четвертичной структурами.

Наличие атома железа в составе гема придаёт молекуле гемоглобина характерную красную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски, на чём и основаны колориметрические методы определение концентрации гемоглобина в крови.

Для стандартных лабораторных исследований концентрации общего гемоглобина в крови наиболее приемлемы колориметрические методы определения, как наиболее дешевые, простые и быстрые в исполнении.

Также используются химические и спектрофотометрические методы определения, они имеют высокую точность, но в тоже время и более высокую сложность выполнения и стоимость анализа по сравнению с колориметрическими методами.

Наиболее старым методом определения содержания гемоглобина считается метод Сали – реакция гемоглобина с соляной кислотой с образованием солянокислого гематина.

Метод основан на визуальном определении содержания гемоглобина путем сравнения окраски исследуемой пробы со стандартными растворами солянокислого гематина.

Погрешность метода является достаточно большой, около 30%, на результаты определения влияют многие факторы: время реакции между гемоглобином и соляной кислотой, белковый состав крови, концентрация билирубина в крови.

В крови человека гемоглобин находится в основном в виде оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина и в небольшом количестве – метгемоглобина, карбоксигемоглобина и вердоглобина.

Каждая из упомянутых форм имеет свой световой спектр поглощения.

При использовании колориметрических методов определения гемоглобина возникает проблема в выборе такого химического реагента, который бы превращал все виды гемоглобина только в один продукт реакции с единым спектром поглощения.

Рис. 2. Ход определения гемоглобина в крови колориметрическим методом

Колориметрическими методами, которые при фотометрическом определении имеют наименьшую ошибку и позволяют количественно перевести разные виды гемоглобина в одну форму, являются гемиглобинцианидный, гемихромный и гемиглобиназидный методы. В настоящее время в большинстве стран в качестве стандартного, как наиболее точный и надежный, признан гемиглобинцианидный метод определения концентрации гемоглобина.

Гемиглобинцианидный метод разработан в 1936 г Драбкиным и был одобрен Международным Комитетом по стандартизации в гематологии (ICSH) в 1963 г. Принцип данного метода основан на переводе всех видов гемоглобина в одну форму – гемиглобинцианид.

В ходе анализа образец крови помещают в трансформирующий раствор, который содержит феррицианид калия (железосинеродистый калий), цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент. Дигидрофосфат калия выполняет роль буфера, стабилизирующего значение рН раствора, при котором реакция проходит в течении нескольких минут.

Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и поддерживает белки плазмы крови в растворённом состоянии, что предотвращает помутнение раствора. Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин (гемиглобин), который при взаимодействии с анионами цианида образует гемиглобинцианид.

Комплекс гемиглобинцианида окрашен в красный цвет, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.

Существуют некоторые модификации состава трансформирующего реагента, в которых цианид калия заменяется на ацетонциангидрин, дигидрофосфат калия – на гидрокарбонат натрия, детергент отсутствует совсем.

Для гарантии точности метода применяют калибровочные растворы с точно установленной концентрацией гемоглобина. Калибровочные растворы гемоглобина – это высокоочищенные заменители крови человека, не содержащие примесей, искажающих результаты анализа.

Существуют наборы контрольных растворов гемоглобина с различной концентрацией. Калибровочные растворы гемиглобинцианида получают, как правило, путем введения контрольного раствора в трансформирующий раствор.

По данным измерения оптической плотности полученных растворов строят калибровочный график и проводят калибровку измерительного прибора.

Гемихромный метод является более современным методом определения гемоглобина, он отличается от гемиглобинцианидного метода отсутствием цианистых соединений в составе рабочего реагента и заменой их на более безопасные соединения.

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови разработан Ахрем А.А. с соавторами в 1986 г.

Набор реагентов для определения гемоглобина в крови, основанный на данном методе, одобрен Комитетом по новой медицинской технике МЗ РФ и рекомендован к применению в клинико-диагностических лабораториях уже в 1998 г. гемоглобин кровь белок эритроцит

Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в гемихром.

В ходе анализа образец крови добавляют в трансформирующий раствор, который содержит жирные кислоты с феррицианидом калия или детергент додецилсульфат натрия (SDS), при этом происходит превращение гемоглобина в окисленную низкоспиновую форму – гемихром, имеющую красноватый цвет. Интенсивность окраски гемихрома прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе крови.

В перечисленных методах содержание гемоглобина в крови определяют путём измерения оптической плотности полученного раствора с помощью фотоколориметра при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр), а расчет концентрации производят по калибровочному графику.

В качестве аналитического оборудования используются фотометры со светофильтрами, спектрофотометры, фотоэлектрические гемоглобинометры, автоматические лабораторные анализаторы.

Гемоглобинометры представляют собой полуавтоматические цифровые лабораторные анализаторы, в которых после измерения оптического поглощения анализируемого раствора на дисплее сразу выдается концентрация гемоглобина в граммах на литр крови.

При определении общего гемоглобина в крови материалом для исследования является свободнотекущая капиллярная или венозная кровь; в качестве антикоагулянтов добавляются ЭДТА, гепарин, оксалат аммония или оксалат калия. Нормальные значения концентрации общего гемоглобина составляют у мужчин 130-160 г/л; у женщин; 120-140 г/л.

Помимо определения концентрации общего гемоглобина в крови, существует необходимость определения малых количеств свободного гемоглобина в образцах плазмы капиллярной крови, сыворотки венозной крови, промывных жидкостях при проведении хирургических операций. Целью определения концентрации свободного гемоглобина является:

· количественная оценка внутрисосудистого гемолиза, который может приводить к развитию серьёзных заболеваний;

· оценка уровня гемолиза в донорской крови и ее компонентах;

· определение изменения уровня плазменного гемоглобина после воздействия различных факторов на организм человека;

· измерение уровня гемоглобина в ирригационных растворах при хирургических процедурах и операциях для определения уровня кровопотери.

Для определения свободного гемоглобина широкое применение нашел бензидиновый метод, который основан на окислении бензидина свободным гемоглобином в присутствии перекиси водорода.

В ходе анализа проба сыворотки крови вносится в раствор, который содержит бензидин, перекись водорода и ацетатный буфер для поддержания требуемого уровня рН. Измеряют показатель оптической плотности раствора на спектрофотометре при длине волны 600 нм.

Раствор инкубируют в течение определённого времени при постоянной температуре. Далее проводят измерения повторно и по изменению величины оптической плотности вычисляют содержание свободного гемоглобина.

свободного гемоглобина в сыворотке крови здоровых людей варьирует в пределах от 0,017 до 0,045 г/л.

На сегодняшний день при определении концентрации свободного гемоглобина используются более современные методы анализа, такие как метод сканирующей и термолинзовой спектрофотометрии.

В клинической лабораторной практике применяются специализированные лабораторные анализаторы, которые позволяют измерять низкий уровень гемоглобина.

Данные способы исследования высокотехнологичны, менее трудоёмки, обладают высокой точностью.

Размещено на Allbest.ru

  • Особенности развития, строения, химического состава, обмена веществ и функций эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Существующие типы гемоглобина. Токсичные формы кислорода в крови человека. Основные составляющие антиоксидантной системы организма.презентация [202,4 K], добавлен 18.05.2015

Источник: https://revolution.allbest.ru/biology/00566026_0.html

24.Диагностика гемолитических состояний. Методы ищучения аномальных форм гемоглобина

Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Гемолитическаяанемия— групповое название достаточно редковстречающихся заболеваний, общимпризнаком которых является усиленноеразрушение эритроцитов, обусловливающее,с одной стороны, анемию и повышенноеобразование продуктов распада эритроцитов,с другой стороны — реактивно усиленныйэритропоэз.

Причины:

Патогенетическуюоснову наследственных гемолитическиханемий составляют генетические дефектымембран эритроцитов, их ферментныхсистем либо структуры гемоглобина.Данные предпосылки обусловливаютморфо-функциональную неполноценностьэритроцитов и их повышенное разрушение.

Развитиюиммунных гемолитических анемий могутспособствовать посттрансфузионныереакции, профилактическая вакцинация,гемолитическая болезнь плода, приемопределенных лекарств (противомалярийныхпрепаратов, сульфаниламидов, производныхнитрофуранового ряда, анальгетиков).

Аутоиммунные реакции с образованиемантител, агглютинирующих эритроциты,возможны при гемобластозах (остромлейкозе, хроническом лимфолейкозе,лимфогранулематозе, миеломной болезни),аутоиммунной патологии (СКВ, неспецифическомязвенном колите), инфекционных заболеваниях(инфекционном мононуклеозе, токсоплазмозе,сифилисе, вирусной пневмонии).

Вряде случаев острому внутрисосудистомугемолизу предшествует отравлениемышьяковистыми соединениями, тяжелымиметаллами, уксусной кислотой, грибнымиядами, алкоголем и др.

Механическоеповреждение и гемолиз эритроцитов можетнаблюдаться при тяжелых физическихнагрузках (длительной ходьбе, беге,лыжном переходе), при ДВС-синдроме,малярии, злокачественной артериальнойгипертензии, протезировании клапановсердца и сосудов, проведении гипербарическойоксигенации, сепсисе, обширных ожогах.

Центральнымзвеном патогенеза гемолитических анемийявляется повышенное разрушениеэритроцитов в органах ретикулоэндотелиальнойсистемы (селезенке, печени, костноммозге, лимфатических узлах) илинепосредственно в сосудистом русле.Эти процессы сопровождаются развитиеманемического и желтушного синдромов(так называемой «бледной желтухой»).Возможно интенсивное окрашивание калаи мочи, увеличение селезенки и печени.

Классификация:

Наследственныегемолитические анемии включают следующиеформы:

  • эритроцитарные мембранопатии (микросфероцитоз – болезнь Минковского-Шоффара, овалоцитоз, акантоцитоз) – гемолитические анемии, обусловлены структурными аномалиями мембран эритроцитов
  • ферментопении (энзимопении) – гемолитические анемии, вызванные дефицитом тех или иных ферментов (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, пируваткиназы и др.)
  • гемоглобинопатии – гемолитические анемии, связанные с качественными нарушениями структуры гемоглобина или изменением соотношения его нормальных форм (талассемия, серповидно-клеточная анемия).

Приобретенныегемолитические анемии подразделяютсяна:

  • мембранопатии приобретенные (пароксизмальная ночная гемоглобинурия – б-нь Маркиафавы-Микели, шпороклеточная анемия)
  • иммунные (ауто- и изоиммунные анемии) – обусловлены воздействием антител
  • токсические – гемолитические анемии, обусловленные воздействием химических веществ, биологических ядов, бактериальных токсинов
  • гемолитические анемии, вызванные механическим повреждением структуры эритроцитов (тромбоцитопеническая пурпура, маршевая гемоглобинурия)

Другиегемолитические анемии

  • гемолитическая желтуха новорождённых, при которой материнские антитела разрушают эритроциты плода или ребёнка,
  • идиопатическая (примерно 50 % случаев гемолитических анемий),
  • вторичная (например при лимфоме, причём анемия может быть первым проявлением лимфомы)

Клиническаякартина:

Увеличениепродуктов распада эритроцитов клиническипроявляется желтухой лимонного оттенка,повышением содержания в крови непрямого(неконъюгированного) билирубина(гипербилирубинемия) и сывороточногожелеза, плейохромией желчи и кала,уробилинурией. При внутрисосудистомгемолизе добавочно возникаютгипергемоглобинемия, гемоглобинурия,гемосидеринурия. Об усилении эритропоэзасвидетельствуют ретикулоцитоз иполихроматофилия в периферическойкрови, эритронормобластоз костногомозга.

Диагностика:

Впроцессе осмотра оценивается окраскакожных покровов, склер и видимыхслизистых, производится пальпацияживота для оценки величины печени иселезенки. Сплено- и гепатомегалияподтверждается при проведении УЗИпечени и селезенки.

https://www.youtube.com/watch?v=Vwq9FAO9C04

Измененияв гемограмме характеризуются нормо-или гипохромной анемией, лейкопенией,тромбоцитопенией, ретикулоцитозом,ускорением СОЭ. При аутоиммунныхгемолитических анемиях большоедиагностическое значение имеетположительная проба Кумбса (антиглобулиновыйтест для определения неполныхантиэритроцитарных антител).

Вбиохимических пробах крови определяетсягипербилирубинемия (увеличение фракциинепрямого билирубина), увеличениеактивности лактатдегидрогеназы.Исследование мочи выявляет протеинурию,уробилинурию, гемосидеринурию,гемоглобинурию. В копрограмме повышеносодержание стеркобилина.

Исследованиепунктата костного мозга обнаруживаетгиперплазию эритроидного ростка.

Методыизучения аномальных форм гемоглобина:

Спомощью физико-химических методовисследования (электрофорез, хроматография)удалось установить существованиеразличных его типов как в нормальных,так и в патологических условиях. Внастоящее время известны три формынормального гемоглобина:

  • Примитивный гемоглобин (гемоглобин Р) находится в эритроцитах зародыша между 7 – й и 12 – й неделями, затем сменяется фетальным гемоглобином.
  • Фетальный гемоглобин (гемоглобин F) представляет собой основную массу гемоглобина с 9 – 13 недельного возраста эмбриона.
  • Гемоглобин взрослых (гемоглобин А)

Патологическиеформыгемоглобина:

  • Гемоглобин S (отличается строением четвертого пептида, в котором на шестом месте вместо глутаминовой кислоты находится электрически нейтральный валин)
  • Гемоглобин F
  • Гемоглобин С (отличается строением четвертого пептида молекулы гемоглобина, в котором на шестом месте вместо глутаминовой кислоты находится лизин)
  • Гемоглобин D
  • Гемоглобин Е

Источник: https://studfile.net/preview/6831651/page:14/

Методы определения гемоглобина в крови: подробно о каждом

Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Гемоглобин (Hb) – молекула, с помощью которой переносится кислород. Она расположена внутри зрелых эритроцитов, лишенных ядер. Клетки получают кислород из альвеол легких, переносят его органам к клеткам-мишеням.

От них получают углекислый газ, и переносят его обратно в легочную систему. Без этого действия невозможна жизнь человека. Существуют различные состояния, при которых гемоглобин может повышаться или снижаться.

Для диагностики используют различные лабораторные методы определения функции соединения гемоглобина. Их подбирает врач индивидуально для каждого пациента.

У взрослого человека норма концентрации Hb зависит от пола:

  • женщины 11-14г/% или 110-140 г/л;
  • мужчины 12-16 г/% или 120-160 г/л.

Для мужчин норма более завышена, так как они имеют большую мышечную массу, по сравнению с женщинами.

Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

  • сниженная концентрация эритроцитов в следствии железодефицитной, серповидно-клеточной анемии;
  • недостаточное количество веществ, которые влияют на продукцию эритроцитов (фолиевая кислота, витамин B12);
  • заболевание красного костного мозга.

Повышенная концентрация Hb наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

  • повышенная продукция эритроцитов при заболевании красного костного мозга, злокачественных новообразованиях;
  • компенсаторное повышение количества эритроцитов вследствие сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
  • снижение количества плазмы крови вследствие чего число форменных элементов повышается в 1 л биологической жидкости.

Гемоглобин появляется в эритроцитах после утраты ядра и приобретении зрелости клетки. Местом утилизации красных кровяных клеток и Hb является селезенка. Жизненный цикл 1 клетки совместно составляет 120 дней. После гибели в кровь выделяется железо, которое поставляется в красный костный мозг. С помощью этого элемента продуцируются новые красные кровяные тельца.

Метод Сали для определения гемоглобина в крови

Определение количества гемоглобина по методу Сали редко применяется в клинических учреждениях, так как существуют более совершенные способы.

Получают биологическую жидкость человека, в которую добавляют хлористоводородная кислоту. Раствор тщательно перемешивают. Это позволяет Hb перейти в другую форму – солянокислый гематин. Добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока окрашивание не будет идентичным с контрольной пробиркой (коричневый цвет).

На нижнем мениске пробирки будет стоять цифра, которая указывает на содержание показателя в 100 г крови. Для вычисления концентрации в 1 литре, показатели умножают на 10. Процентное содержание Hb вычисляется с помощью пропорции:

16,7%=100

  • А%=Х
  • Х=А×100/16,7
  • Х – определяемый показатель,
  • А – полученное число гемоглобина с помощью гемометра,
  • 16,7 – процентное количество гемоглобина в контрольной пробе.

Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина

Наиболее точным методом определения гемоглобина является использование спектрофотометра. Он определяет только 1 из форм гемоглобина, улавливая длину его волны. В крови человека существуют различные формы Hb:

  • Оксигемоглобин;
  • Дезоксигемоглобин;
  • Карбоксигемоглобин;
  • Метгемоглобин.

Для исследования с помощью спектрофотометра необходим перевод показателей только в 1 из форм. Для этого применяют различные реактивы. Показатель окрашивается определенным цветом (красный, зеленый). Его длину волны улавливает прибор, подсчитывает все элементы в заданной траектории.

Аммиачный метод определения гемоглобина

Аммиачный метод количественного определения гемоглобина соответствует предыдущим способам. Разницу составляет использование аммиака в концентрации 0,04%.

Проба должна настояться, чтобы произошла реакция перехода всех форм Hb в одну. Ее рассчитывают с помощью полуавтоматического анализатора в виде спектрофотометра. Раствор помещают в кювету, устанавливают в прибор.

Рассчитывают показатель на длине волны 543 нанометров.

Методы определения гемоглобина в моче

Существует 4 разновидности исследования мочи. Каждая из них отличается применяемыми реактивами. Для исследования собирают только свежую порцию урины. Если она настоится, Hb превратиться в медгемоглобин, Поэтому реакция будет невозможна. Урину подготавливают. Для этого к ней добавляет 2 мл уксусной кислоты и 5 мл диэтилового эфира.

  • Реакция с гваяковой кислотой. Разводят щепотку кислоты, добавляют 3 мл этанола 96%. Добавляют 8-10 капель получившейся жидкости к 8-10 каплям разведенной урины. Если Hb присутствует в образце, он окрашивается в синий цвет.
  • Реакция с амидопирином. К 2-3 мл разведенной урины добавляют 10 капель раствора амидопирина и 10 капель 3% перекиси водорода. Если Hb присутствует, урина окрашивается в фиолетовый цвет.
  • Реакция с бензидином. В пробирку добавляют 6 капель бензидина, 6 капель 3% перекиси водорода,4 капли чистой урины. Если Hb присутствует, получившаяся жидкость окрашивается в зеленый цвет.
  • Использование тест-полосок, таблеток. Они содержат специализированные реактивы в готовом виде. Полоски опускают в мочу, достают, оценивают цветовую шкалу. Таблетки полностью растворяют в биологической жидкости человека. Индикаторная шкала подписана на упаковке.

Какой метод определения гемоглобина наиболее точный?

Наиболее точным методом определения показателя считается фотоколориметрический с использованием гемихромного разведения. С помощью него снижается риск врачебной ошибки. Прибор автоматически подсчитывает показатель. Здесь важно правильно подготовить приборы, пробирки, кюветы, настроить аппарат. Методика безопасна для лаборанта.

В определении Hb в моче наиболее информативным является использование тест-полосок. Здесь полностью исключается риск неправильного разведения реактивов. 

Определение гемоглобина является важным информативным тестом. Можно определить кровотечение в мочевыводящих путях, состояние сердечно-сосудистой и легочной системы.

С помощью методов вовремя выявляются различные виды анемии при низких концентрациях гемоглобина. После получения данных рекомендуется обратиться к лечащему врачу.

Он расшифрует полученный результат, выявит нормы и отклонения, назначит лечение. 

Узнай о методах определения гликозилированного гемоглобина в крови!

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Источник: https://mirmam.pro/metody-opredeleniya-gemoglobina-v-krovi

ДляЗдоровья
Добавить комментарий