Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Методы подсчета эритроцитов с использованием счетной камеры Горяева

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Берут заполненный меланжер для эритроцитов , зажав его концы 3 и 1пальцами , в течение одной минуты встряхивают.

После тщательного перемешивания , выпустив предварительно наружу 1-2капли, наносят небольшую капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком . Излишки р-а при этом стекают в желобки. Заполнив камеры, ставят ее под микроскоп. Если фор.

эл-ты расположены равномерно, приступает к подсчету эритроцитов. Чтобы получить данные необходимо подсчитать число э. в пяти больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например: по диагонали.

Методы подсчета лейкоцитов с использованием камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для лейкоцитов, зажав его концы 3и 1 пальцами, в течение одной мин встряхивают его, после перемешивания ,выпустив предварительно наружу 1-2 капли крови наносят небольшую капельку на сетку камеры , предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком .

Излишки р-а стекают в желобки. Для получения результатов подсчет произв в 25 больших квадратах, что составляет 400мал.квадратиков.Формула для вычисления кол-ва лейкоцитов в 1мл крови.

X=B*400*20 и это все разделить на 400, где x-искомое число лейкоцитов в 1мл крови, в число лейк в 20больших квадратах.

Определение кол-ва гемоглобина в крови методом Сали.

В среднюю пробирку наливают 0,1н р-р хлористо-водородной кислоты до метки. Пипеткой берут 20мм в кубе крови из пальца сразу выдувают кровь на дно пробирки, так, чтобы верхний слой к-ты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку споласкивают ее кислотой. После содержимое пробирки перемешивают ударяя пальцем по дну пробирки.

Затем ставят в штатив на 5-10 мин. За это время гемоглобин полностью превращается в солянокислый гематин. Затем в пробирку добавляем по каплям дистил. воду , перемешивая р-р стеклянной палочкой, до тех пор пока цвет р-а не будет одинаков цветом стандарта.

цифра , стоящая на уровне полученного р-а показывает содержание гемоглобина в испытуемой крови.

Определение кол-ва гемоглобина в крови, с помощью фотокалориметра.

Для опред. сод. гемоглобина кровь берут обычным способом из пальца и смешивают ее в пробирки с 4 мл р-а I. В эту пробирку добавляют 0,1 мл р-а III . Смесь перелив в кювету. Через 1-2 мин происходит гемолиз.

Гальванометр соед со стабилизатором, а его вкл в сеть. Отмечают положение стрелки гольванометра, которое показывают отн.сод. гемоглобина в крови в % .на основании полученных данных, рассчитывают абсол. сод.

гемоглобина в крови .

Определение гематокритного числа.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел или проделывают работу с кровью кролика. Гематокритные капилляры промыв р-Ом цитрата натрия и заполн кровью. Цетрифугируют 30мин при3000 об/мин. При этом под действием центробежной силы фор. эл-ты смещаются к кроям капилляров. Ближе к оси центрифуги остается столбик плазмы.

Определение времени свертыв. крови.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел. Набирают в капилляр 25-30 мл крови. Отмечают по секундомеру время. Держа капилляр двумя пальцами , покачивает его на 30-45 градусов в обе стороны. Свободное смещение крови показыв, что свертывание еще не наступило. Полное свертывание крови соответствует моменту полной остановки движения крови.

Определение цветового показателя крови.

Определив в крови содержание гемоглобина и кол-во э.высчитывают цветовой пок по формуле. ЦП= гемоглобин ,гр/л разделить на число э.в одном микролитре крови ( первые три цифры) это все * на 3. В одном мкл крови в норме сод.166* 10 в -6 гемоглобина .

Следов, содержание гемоглобина в одном эритроците = 33*10 в -12 гр или 33пг. ЦП это соотн между кол.гемоглобина в крови и числом эритроцитов . ЦП позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобина . При пат.

состояниях ЦП может быть больше 1 или меньше 1.

9) приготовление мазка крови.
Взяв предметное стекло прикасаются его поверхностью капли крови. Предметное стекло держит в левой руке, а правой рукой представл шлифовальное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45 градусов и продвигают его вправо до соприкосновения его с кровью.

Выжидают пока кровь расплывется по всему ребру шлифовального стекла и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор пока не будет исчерпана вся капля . Капля крови должна быть небольшой.мазок должен помещаться на стекле, не доходя одного см до его края.

Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет

10) определение лейкоцитарной формулы.Процентное соотношение разл видов лейкоцитов , выявленных в мазке крови , опр-ся как лейкоцитарная формула. Общее кол-во в 1 л. крови: 4-9 умножить на 10 в девятой . Эозинофилы: 0,5-5. Базофилы: 0-1. Нейтрофилы: юные – 0-1; палочкаяд.-1-6; сегментояд.- 47-72. Моноциты 3-11.

Лимфоциты – 19-37

Определение СОЭ.

Капилляр промывают 5%р-ром цитрата натрия. Затем набирают 50мл. цитрат натрия и выдувают его на часовое стекло. В этот же капилляр двукратно набирают кровь из пальца чел.

Обе порции крови выпускают на часовое стекло, смешивая с имеющимся там цитратом натрия. Полученную смесь набирают в капилляр и ставят в штатив. Через час смотрим высоту в мм образовавшейся плазмы в капилляре.

Его величина и явл. мерой СОЭ . В норме СОЭ сост. от 4 до 10 мм/ч

12) метод определения группы крови с исп гемаглютин.сывороток.

Предметное стекло помещают на белую бумагу и наносят по капле станд.сыворотки I,II,III групп , сод.соотв.агглютинины . I-альфа и бетта; II-бетта и III-альфа. Переносим небольш.кол.крови в каплю сыворотки 1группы. Затем, такое же кол.крови переносят в сыворотку 2 группы. 3-юю каплю переносят в сыворотку 3-ей группы.

Каждый раз тщательно размешиваем кровь в капле сыворотки пока смесь не примет равномерно розового цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля становится прозрачной , а эритроциты склеиваются . 1. Отсутствие агглютинации говорит об отсутствие агглютиногенов, что явл св-Ом эритроцитов 1 группы. 2.

Если агглют.произошла с сыв. первой и третьей групп, то э.исследуемой крови, содержат А-агглютиноген, следов эта кровь второй группы. 3. Если агглют.проищошла с сыв. первой и второй групп это говорит о наличии В-агглютиногена в эритроцитах-3 группа крови.

4. При наличии агглютинации сыв.

второй и третьей групп эритроциты содержат А и В агглютиногены-4 группа крови.

13. Методика определения резус-антигена D универсальным реагентом анти- D.

На дно пробирки вносят 1 каплю стандартного реагента антнрезус;

добавляют каплю исследуемой крови (или эритроцитов);

содержимое пробирки перемешивают встряхиванием;

медленно поворачивают пробирку, наклоняя ее почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам.

Такое распределение крови по стенкам пробирки делает реакцию более выраженной; агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и четко выраженной агглютинации, а также ввиду возможности замедленной реакции при наличии антигена D, контакт эритроцитов с реагентом при перевертывании следует проводить не менее 3 мин;

для исключении неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают, не взбалтывая, путем 2-3 -кратного перевертывания пробирки;

оценку производят визуально.

14) анализ ПСС. Опыт Станиуса.
Обездвиж.ляг избегая сил.кровотеч.обнаж.сердце и перевяз.первой лигатурой обе дуги аорты после чего перерез.их выше места перевязки. Подсчит.число сокращ.в одну мин. Запрокид.сердце и наход.границу синуса на его дорс.стороне. Пров.лигат.подвеноз.

синус и на границе между син.и предс.делаем перевязку. ( первая лиг.станиуса) . Частота сокращ.венозн.синуса не меняется, а предс и желуд.останавл. Подсчит.число сокращ.венозного синуса. Если после первой лигатуры сокращ.предс и жел.не восстан.самост., то дел 2 перевяз. ( 2 лиг.станиуса) отдел предс от жел.

Теперь, буд сокр веноз синус и жел. Частота сокращ его будет более редкой по отн к перв. Затем деляют 3 перевязку( 3 лиг.станиуса) отдел яя от всего сердца нижнюю треть жел. ( верхушку сердца) , кот перест.сокращ. Если отрезать верхушку сердца и поместить в каплю р-а Рингера , то нанося ей мех.раздраж.

( укол иглой) можно наблюд ее способность сокращ.

Рекомендуемые страницы:

Источник: https://lektsia.com/2x17e0.html

Подсчет эритроцитов в камере Горяева: формула с примером

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Камера Горяева – оптическое приспособление, необходимое для вычисления количества клеток в биологических жидкостях человека. Устройство применяется во всех медицинских учреждениях. За ним необходим тщательный уход, чтобы подсчет эритроцитов в камере Горяева был достоверен. Метод достаточно информативен, удобен для врачей-лаборантов.

Приспособление представлено толстым стеклом, в котором расположены углубления. Они необходимы для залития биологической жидкости человека. Сверху помещается тонкое предметное стекло, которое способствует устранению пузырьков воздуха и распределению биологической жидкости по углублению.

Устройство позволяет подсчитывать количество лейкоцитов и эритроцитов с помощью микроскопа, направленного на углубление. Полученные данные подставляют в формулу, чтобы выявить число клеток в заданном объеме жидкости.

Под микроскопом врач-лаборант видит большие и малые квадраты, которые в сумме составляют 225. За одно исследование необходимо подсчитать клетки в 100 квадратах.

Обслуживание и уход за камерой Горяева

Чтобы приспособление выполняло свои функции, врач-лаборант правильно подсчитал форменные элементы, за ним необходимо ухаживать. Оно должно быть всегда чистым, стерильным. Наличие инородных предметов затруднит исследование.

В ходе работы при подсчете эритроцитов в камере Горяева выполняют следующие дезинфицирующие манипуляции:

  • с помощью марлевой салфетки, опущенной в спиртовой раствор, протирают все углубления камеры;
  • сухой марлевой салфеткой повторно протирают поверхность;
  • приспособление готово к работе, если с обеих его сторон появились радужные круги.

После окончания работы устройство дезинфицируют повторно:

  • биологическую жидкость удаляют;
  • камеру помещают в спиртовой раствор на полчаса, если используются другие дезинфектанты, время удлиняют до 60 минут;
  • приспособление достают, протирают насухо до появления радужных кругов;
  • стекло оставляют на сухой поверхности.

Алгоритмы подсчета эритроцитов в камере Горяева

Получают капиллярную кровь с помощью прокола скарификатором подушечки пальца. Важно, чтобы первая капля не попала в капилляр, так как в ней содержится тканевая жидкость и поврежденные эритроциты. Собирают кровь в капилляр.

Далее проводят манипуляция для проведения исследования с помощью камеры Горяева.

  • Кровь необходимо развести в 200 раз. Для этого используют раствор хлорида натрия.
  • Камеру подготавливают для проведения анализа, протирая её спиртовым раствором и сухой марлевой салфеткой. Нельзя использовать для этих целей вату, так как ее волокна могут остаться на стекле, что затруднит проведение анализа.
  • Покровное стекло ставится сверху камеры. Делают это аккуратно, чтобы оно точно встало в пазы.
  • Стеклянной палочкой берут немного образца биологической жидкости и подносят к отверстиям углублений. Кровь должна медленно распределиться по камере. Выжидают 1-2 минуты, чтобы исчезли пузырьки.
  • Микроскоп ставят на малое увеличение и подсчитывают количество эритроцитов в 80 малых квадратах сетки.
  • Полученное число подставляют формулу, рассчитывая количество красных кровяных телец на заданный объем биологической жидкости.

Метод является достаточно информативным, но возможны погрешности. Врач может ошибиться в подсчетах с помощью микроскопа, или взять объём жидкости, в котором находится недостаточно эритроцитов.

Поэтому при появлении погрешностей или не точных результатов терапевт может назначить повторные исследования на полуавтоматическом анализаторе, который подсчитывает точное количество форменных элементов в 1 мл жидкости.

Достоинством метода является то, что врач может обнаружить другие образования помимо эритроцитов, что поможет выявить нарушения в организме.

Формула подсчета количества эритроцитов в камере Горяева

После получения количества красных кровяных телец, число необходимо подставить в формулу. С ее помощью подсчитывается число красных кровяных телец на заданный объем биологической жидкости.

X=(E×4000×200)/80

  • X – количество эритроцитов в заданном объеме биологической жидкости;
  • E – сумма эритроцитов, выявленная под микроскопом;
  • 200 – разведение крови;
  • 80 – число маленьких квадратов, в которых считали клетки.

Чтобы пересчитать эритроциты на 1 л крови, полученный результат умножают на 1012.

Норма эритроцитов и отклонения

В норме количество эритроцитов отличается по полу и возрасту двоеточие

  • мужчины 3,8-5×1012;
  • женщины 4-4,5×1012;
  • дети 5,5-7×1012.

Количество эритроцитов может быть повышено или снижено. Существуют физиологические причины изменения. Например, у женщины во время менструации количество эритроцитов снижено, так как теряется некоторый объём биологической жидкости.

Патологические причины повышения эритроцитов:

  • обезвоживание, вследствие чего уменьшается количество плазмы крови, число форменных элементов увеличивается;
  • рак крови, почек, желез внутренней секреции, изменяющих гормональный баланс в организме;
  • недостаток кислорода в крови, вследствие чего красный костный мозг излишне образует эритроциты.

Патологические причины снижения эритроцитов:

  • большая кровопотеря;
  • периодические кровопотери в следствии небольших кровотечений из слизистых оболочек ЖКТ;
  • алиментарный фактор (употребление пищи с малым количеством полезных веществ, микроэлементов, минералов);
  • нарушение всасывания веществ в кишечнике;
  • повышенное содержание плазмы крови;
  • разрушение красных кровяных телец в следствие переливания крови, отравления;
  • хронический алкоголизм, который ухудшает работу почек и красного костного мозга, вследствие чего образуется малое число ретикулоцитов (предшественники эритроцитов).

С помощью камеры Горяева подсчитывают число эритроцитов. Важно знать, что бывают более информативные методы исследования, которые позволяют исключить риск врачебной ошибки.

Приспособление работает точно, если соблюдаются методы его дезинфекции, врач тщательно пересчитывает все клетки.

После получения результата анализов необходимо обратиться к врачу, самостоятельно поставить диагноз невозможно.

Читайте подробный обзор всех методик подсчета количества эритроцитов от врача.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Источник: https://mirmam.pro/podschet-eritrotsitov-v-kamere-goryaeva

Подсчет эритроцитов в камере Горяева — каким образом происходит вычисление уровня эритроцитов?

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Состав крови образован плазмой и форменными компонентами, большую часть из которых составляют эритроциты. Зрелые кровяные клетки не содержат ядра и имеют двояковогнутую форму.

их функция – транспортировка газов в тканях органов.

Уровень эритроцитарных клеток в крови человека зависим от таких факторов, как пол и возраст, но является величиной достаточно постоянной, поэтому колебание их количества дает ценную информацию в процессе диагностирования.

Для вычисления количества кровяных клеток чаще всего используется унифицированный метод подсчета эритроцитов с использованием оборудования, известного, как камера Горяева, либо с помощью электронных счетчиков автоматического типа. Оба способа на данный момент широко используются и в ежедневной лабораторной практике, и при научных изысканиях, так как погрешность результатов, полученных в ходе их применения, минимальна.

Строение камеры Горяева

Оптическое устройство – камера Горяева позволяет вычислить количество кровяных клеток в определенном объёме специальной жидкости. Идея создания устройства принадлежит русскому профессору Горяеву Н. К.

Главный элемент устройства – прозрачное предметное стекло с камерой, образованной углублением в форме прямоугольника, поверхность которой покрыта специальной микроскопической сеткой, и тонкое покровное стекло. Высокая точность результатов подсчета достигается благодаря повышенному объёму сетки в сравнении с аналогичными устройствами других типов.

Сетка устройства имеет площадь 9 мм2, размер одной стороны составляет 3 мм. Поверхность данного элемента образована квадратами общим числом в 225 шт. Из них одна сотня квадратов поделена на прямоугольники, еще столько же – не разграфлено, а 25 штук поделены на 16 более маленьких. Площадь 1 малого квадрата составляет 1/400 мм2, область над ним имеет объём 1/4000 мм3.

Разбавление крови с целью исследования

Определение количества эритроцитов состоит из нескольких последовательных действий. Первым этапом становится разведение определенного объёма крови в реагенте. Делается это в связи с огромным числом форменных элементов.

В качестве реагента чаще всего выступает раствор хлорида натрия концентрацией 0,9%. При необходимости альтернативой служит 5% раствор натрия цитрата. Процедуру разбавления крови выполняют в пробирке или в специальном смесителе, называемом меланжером.

Внимание! Использование растворов с более высокой или низкой концентрацией исключено, так как повлечет за собой разрушение кровяных клеток.

Разбавление крови в меланжере

Меланжером называется изготовленный из стекла градуированный капилляр длинной 10 см с расширением на конце, внутри которого расположен шарик. Последний выполняет важную функцию – равномерное смешивание раствора и крови. Цвет шарика меланжерного капилляра будет красным, если он предназначен для эритроцитов, и белым – для работы с лейкоцитами.

Методика подсчета эритроцитов позволяет проводить процедуру исследования и со стабилизированной кровью, и с нестабилизированным материалом сразу после его забора у пациента.

Кровь набирают меланжерным капилляром до деления 0,5, после чего кончик смесителя очищают от крови с помощью марли либо ватки и следующим действием набирают разбавляющий раствор до деления 101.

Перекрыв пальцами отверстия капилляра, полученный образец тщательно смешивают около 3 минут. В счётную камеру помещают четвёртую каплю, предварительно удалив первые три на марлю.

Таким образом получают разбавление крови в 200 раз.

Разбавление крови в пробирке

При пробирочном методе разбавления крови исследуемый материал разводят в 200 раз следующим образом: 4 мл раствора хлорида натрия помещают в пробирку, после чего добавляют 0,02 мл крови.

Для этого забор материала производят пипеткой, кончик которой протирают ваткой или другой тканью. Образец крови помещают на дно пробирки, пипетку промывают ближе к поверхности раствором хлорида натрия. Готовый образец перемешивают и оставляют до дальнейшего этапа исследования, но менее чем на 3 часа.

Подсчет количества эритроцитов

Камера Горяева обязательно располагается горизонтально. Всю площадь сетки аккуратно заполняют разведенным образцом. Важно проследить, чтобы не образовались пузырьки воздуха, ведь их наличие значительно исказит результат. В таком положении камера остается в течение одной минуты с целью оседания кровяных клеток.

Унифицированный метод подсчета эритроцитов проходит при среднем увеличении посредством микроскопического осмотра. Подсчет числа эритроцитов в камере Горяева ведут в 5 больших квадратах, поделенных на 16 малых.

Начало отсчета рекомендовано производить с большого квадрата, находящегося вверху слева, и далее по диагонали.

Важно! Чтобы количество клеток, находящихся на линиях малых квадратов, не было подсчитано дважды, рекомендуют пользоваться правилом Егорова: в каждом квадрате вести подсчет по двум определенным линиям (верхней и левой).

Начинают высчитывание клеток в малых квадратах в верхнем ряду слева направо от 1-го до 4-го в этом ряду. Переходя к следующему ряду, подсчет ведут в обратном порядке – справа налево. Переход к подсчету клеток в следующем большом квадрате производят после вычисления эритроцитов в этих 16 малых квадратах.

Непосредственно расчет числа эритроцитов ведут по формуле, отображенной на рисунке №2.

Обозначения в данной формуле расшифровываются следующим образом:

  • X – искомое число красных кровяных клеток в 1 мкл крови,
  • A обозначает количество сосчитанных клеток,
  • 200 – разбавление крови,
  • 80 – это количество малых посчитанных квадратов,
  • 1/4000 – объем маленького квадрата.

Внимание! Для достоверности результата расчет кровяных клеток при некоторых видах анемии необходимо проводить непосредственно после забора материала.

Возможные причины искажения результата

Как и любой другой лабораторный анализ, подсчет эритроцитов требует тщательной подготовки и аккуратности в исполнении. Искажение результатов анализа может возникнуть вследствие целого ряда причин. Оборудование хранят в сухом месте. Любая лабораторная работа, связанная с кровью, выполняется в резиновых перчатках.

Для начала следует убедиться в правильности подготовки и использования камеры. Перед работой и по ее окончании устройство необходимо тщательно промывать дистиллированной водой и насухо протирать мягкой тканью. Покровное стекло должно быть подготовлено заблаговременно таким же образом.

Возможные причины, влияющие на достоверность результата:

  • Некачественные реактивы, способные вызывать гемолиз.
  • Формирование сгустка крови в материале.
  • Неаккуратность в процессе забора крови в капилляр.
  • Плохо обработанные пробирки и пипетки.
  • Недобросовестная техника исполнения при работе с камерой и подсчете эритроцитов.
  • Высчитывание клеток сразу же после заполнения камеры (необходимо выждать 1 минуту, чтобы они успели осесть на поверхность).

В последнее время все большую популярность получает метод подсчета эритроцитов с использованием электронных счетчиков автоматического типа. Такая тенденция вполне обоснованна, так как автоматизированный процесс исследования значительно точнее и менее трудоёмок.

Принцип действия данного оборудования основан на разном показателе электропроводности клеток крови и раствора, в котором они помещены. Специальное электромагнитное устройство регистрирует изменение уровня сопротивления электрической цепи, когда эритроциты движутся через отверстие капилляра. Уже через несколько секунд на цифровом табло высвечивается результат с высчитанным числом клеток.

Повышенный показатель красных кровяных клеток в анализе называется полицитемией. Данное состояние возникает вследствие патологий, характеризующихся потерей жидкости в организме, например при диарейном синдроме.

Часто такое явление наблюдается на первых этапах инфекционных заболеваний, при отравлении токсичными веществами и прочем. Снижение же концентрации эритроцитов в крови известно как олигоцитемия.

И зачастую такая патология проявляется во время различного вида анемии.

Загрузка…

Источник: https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/metod-podscheta-kolichestva-eritroczitov-v-krovi-s-pomoshhyu-kamery-goryaeva

Методика подсчета эритроцитов крови в счетной камере Горяева

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета эритроцитов, 3% раствор натрия хлорида, микроскоп. Объект исследованиячеловек.

Проведение работы: Счетную камеру помещают под микроскопом и рассматривают сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец Ньютона.

Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец ранее описанным методом. Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном.

Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха.

Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с 3% раствором натрия хлорида, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т.е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.

Для подсчета эритроцитов берут заполненный меланжер, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. При этом эритроциты сморщиваются и становятся заметнее. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла.

Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, высушить и заполнить снова.

Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Считать эритроциты лучше при малом объективе (х8), используя при этом окуляр х15.

Подсчитывают число эритроцитов в пяти больших квадратах (разделенных на 16 маленьких), расположенных по диагонали от верхнего левого квадрата вниз направо. Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего).

Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют правило Егорова: « к данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся».

Подсчитав сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм3, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм3 разведенной крови.

Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм3 цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая: Х = (Э х 4000 х 200)/80, где х – искомое число эритроцитов в 1мм3 цельной крови, Э – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах, 80 – число маленьких квадратов, в которых произведен подсчет, 200- разбавление крови. Затем полученное число эритроцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т.е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм3, умножают на 1012.

Оформление результатов и их оценка: Записать, сколько эритроцитов содержится в 1 л исследуемой крови. Сравнить полученные результаты с нормой. У взрослых этот показатель составляет 5,0х1012 у мужчин, (3,9-4,5) х1012 у женщин, (4,0-4,5) х1012 у детей школьного возраста, (5,5-7,0) х1012 у новорожденных в первые дни жизни.

Методика определения количества гемоглобина по методу Сали.

Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, 4% раствор цитрата натрия, гемометр Сали, капилляр (с меткой 20 мм3), стеклянная палочка и пипетка. Объект исследованиячеловек.

Проведение работы: Определение количества гемоглобина по Сали производят колориметрическим способом, основанном на следующем принципе: если исследуемый раствор путём разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворённых веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объёмы. Зная количества веществ в стандартном растворе (16,7%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах. Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние сверху запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя – градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 N раствор HCL до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек путём прикладывания фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают её соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по её дну, и оставляют стоять 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору прибавляют по каплям дистиллированнную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандартного (добавляяя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой). Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах. Можно вычислить относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови, например, следующим образом. Допустим, в крови 14 г% гемоглобина, тогда 16,7г % составляет 100%, а 14,0 г% – х. Таким образом, х = 83,9%, что является показателем относительного содержания гемоглобина.

Оформление результатов и их оценка: Результаты необходимо выразить процентным соотношением плазмы и форменных элементов и сравнить с общепринятыми нормальными значениями. У взрослых это соотношение составляет 42-44% у женщин, 44-48% у мужчин, 35-40% у детей и 50-55% у новорожденных.

Источник: https://studopedia.su/13_720_metodika-podscheta-eritrotsitov-krovi-v-schetnoy-kamere-goryaeva.html

Подсчет лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева (методика)

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Камера Горяева

Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.

Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.

Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.

Описание сетки камеры Горяева

Сетка в камере Горяева

Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом.

Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм.

Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм3 или 10-4 мл.

Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.

Правило Егорова для подсчета форменных элементов

Правильный подсчет клеток в сетке

Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.

Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки.

Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова.

Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.

Методика подсчета лейкоцитов

При ошибке анализатора помогает камера Горяева

Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.

Подсчет при помощи камеры Горяева оправдан в тех случаях, когда автоматический анализатор не способен верно идентифицировать клетки крови пациента.

Это случается при онкологических заболеваниях системы крови и некоторых других болезнях, при которых клетки имеют нетипичный вид и объем.

К плюсам визуального подсчета относится возможность углубленной диагностики благодаря тому, что опытный врач способен отличить измененные клетки, характерные для отдельных патологий, и отразить их наличие в результатах анализа.

Лейкоциты должны быть подготовленными перед работой

Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.

После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.

После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах.

Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100).

Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.

Методика подсчета эритроцитов

Соблюдение алгоритма позволяет произвести точный подсчет клеток

Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение.

После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов.

Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.

Источник: https://gidanaliz.ru/poznavatelno/podschet-v-kamere-gorjaeva.html

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Метод подсчета количества эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева

Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, прорезанное четырьмя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки — две боковые и среднюю. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. Она разделена поперечной бороздкой на 2 равные части.

На каждой половине средней пластинки нанесена сетка Горяева. Принадлежностью камеры служит шлифованное покровное стекло. Его следует наложить так, чтобы оно покрыло обе боковые и среднюю пластинки.

Нажимая большими пальцами на края стекла, его притирают к боковым пластинкам до появления радужных колец (кольца Ньютона).

Так как боковые пластинки выше средней, между нею и покровным стеклом остается щель. Это и есть камера, в которую заливают разведенную кровь. Глубина камеры 0,1 мм.

Нанесенная на дно камеры сетка Горяева квадратная. Сторона ее – 3 мм, площадь – 9 мм». Сетка разграфлена на 225 больших квадратов – 15 по горизонтали и 15 по вертикали. Часть больших квадратов (через два на третий) разделена на 16 малых квадратов. Сторона малого квадра­та равна 1/20 мм .

Техника подсчета

Правильное заполнение счетной камеры разведенной кровью обеспечивает точность под­счета форменных элементов. Перед заполнением камеры содержимое пробирки перемешивают, вращая ее между ладонями в течение 2 мин.

Разведенную кровь наносят на среднюю пластинку камеры пастеровской пипеткой с баллоном или стеклянной палочкой, помещая ее около края покровного стекла.

По закону капиллярности жид­кость затекает под стекло, заполняя камеру.

После заполнения камеру нужно положить на стол на 2-3 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и клетки не расположатся неподвижно на фоне квадратов сетки. При заполнении камеры жидкость не должна стекать в борозды. Недопустимо попадание в камеру пузырьков воздуха.

Подсчет производят под малым” увеличением микро­скопа (об.8, ок.10 или 15), конденсор должен быть опущен, а диафрагма закрыта.

Возможные ошибки при подсчете:

Правила:

– к данному квадрату принадле­жат клетки, находящиеся большей своей половиной внут­ри него;

– клетки, разделенные пограничной линией попо­лам, считают только на верхней и левой границе квадрата;

– клетки же, лежащие большей своей половиной вне данно­го квадрата не считают вовсе.

Принцип. Подсчет эритроци­тов под микроскопом в определенном количе­стве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведе­ния крови.

Реактивы. 0,9 % раствор хлорида натрия

Специальное оборудование. 1. Счетная камера Горяева. 2. Микроскоп.

Ход исследования. Разводят иссле­дуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую про­бирку отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипет­кой набирают 0,02 мл крови.

Кончик пипетки вы­тирают фильтровальной бумагой или марлей, и кровь выдувают на дно пробирки; пипетку тща­тельно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и остав­ляют стоять до момента счета (рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2-3 ч после взятия крови, а при гемолитических и.

В 12-дефи­цитных анемиях — сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться). Недопустимо оставлять взятую кровь с несосчитанными эри­троцитами на следующий день, так как эритро­циты частично разрушаются.

Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, за­тем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это сви­детельствует о требуемой высоте камеры — 0,1 мм).

Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщатель­но встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков воздуха запол­нила всю поверхность камеры с сеткой, не зате­кая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении 1 мин (ДЛЯ ОСЕДАНИЯ эритроцитов).

Для подсчета эритроцитов – микроскоп (объектив на 8х, окуляр на 10Х), находят верхний левый край сетки. Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах.

Расчет количества эритроцитов:

производится по следующей формуле:

Х= а ? 4000 ? в

б

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови;

а — количество формен­ных элементов, сосчитанных в 80 малых квадратов;

б— количество сосчитанных малых квадратов;

в — степень разведения крови; 1\4000 мкл — объем малого квадрата; умножая на 4000, приводим к объему 1 мкл крови.

Сокращенная формула: Х= а х10000

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: https://studopedia.ru/6_69836_metodika-podscheta-eritrotsitov-v-kamere-goryaeva.html

ДляЗдоровья
Добавить комментарий